原代肝細(xì)胞也廣泛應(yīng)用于嵌合體肝模型當(dāng)中。通過將正常人原代肝細(xì)胞移植到患有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)的肝特異uPA轉(zhuǎn)基因小鼠中,可以成功地構(gòu)建嵌合體肝。而轉(zhuǎn)基因小鼠的uPA表達(dá)能夠促使鼠肝細(xì)胞死亡,從而為人原代肝細(xì)胞的移植、重建和增殖提供了一個適宜的微環(huán)境。在這種重建的嵌合體肝內(nèi),人肝細(xì)胞占據(jù)了大約75%的比例,并且能夠持續(xù)高水平地表達(dá)人血清蛋白。通過使用病人血清和病毒核酸影響這種嵌合體小鼠,研究人員發(fā)現(xiàn)在肝內(nèi)可以檢測到病毒的RNA。然而,病理觀察并未發(fā)現(xiàn)病毒影響所導(dǎo)致的細(xì)胞病變。這一發(fā)現(xiàn)為研究病毒影響的機(jī)制提供了新的途徑,并為開發(fā)解決病毒影響的新方法提供了新的思路。此外,這項研究還為研究肝細(xì)胞移植和重建提供了新的實(shí)驗(yàn)?zāi)P汀Mㄟ^將人原代肝細(xì)胞移植到轉(zhuǎn)基因小鼠中,研究人員可以更好地研究原代肝細(xì)胞的生長、分化和功能,從而為克服肝病提供新的思路和方法。這項研究的結(jié)果具有重要的臨床意義,有望為克服肝病和病毒影響提供新的策略。原代肝細(xì)胞不能傳代和長期培養(yǎng),會丟失肝細(xì)胞分化特性與功能,通過誘導(dǎo)去分化做成肝祖細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。廣東新西蘭兔原代肝細(xì)胞種類
原代肝細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)有許多獨(dú)特的形態(tài)特征。原代肝細(xì)胞是指從新鮮肝臟組織中分離出來的一種細(xì)胞類型,呈多邊形或多角形形狀,大小約為20-30微米。原代肝細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì),核小而高亮,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,也有雙核情況存在。原代肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的細(xì)胞器和細(xì)胞骨架,濃稠且顏色較深。此外,原代肝細(xì)胞表面具有許多微絨毛和微細(xì)突起,這些結(jié)構(gòu)有助于細(xì)胞之間的黏附和交流。同時,原代肝細(xì)胞具有高度的代謝活性和生物合成能力,能夠合成和分泌多種生物活性物質(zhì),如蛋白質(zhì)、hormone、細(xì)胞因子等。這些獨(dú)特的形態(tài)特征使得原代肝細(xì)胞成為研究肝臟生理和病理過程的重要模型細(xì)胞。佛山人體原代肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)人原代肝細(xì)胞保留了細(xì)胞在體內(nèi)環(huán)境里的功能與特性,是較為接近臨床的一種標(biāo)準(zhǔn)體外短期培養(yǎng)模型。
原代肝細(xì)胞是藥物代謝研究的重要組成。原代肝細(xì)胞(Primaryhepatocytes)是指從動物肝臟直接分離的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞,具有不可替代的優(yōu)勢。原代肝細(xì)胞與體內(nèi)環(huán)境保持一致,酶量與輔助因子水平濃度與正常生理濃度貼合,滿足在接近生理狀態(tài)情況下研究藥物代謝和毒性的需求,真實(shí)反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況。同時,利用原代肝細(xì)胞在體外進(jìn)行研究,無須擔(dān)心動物實(shí)驗(yàn)的倫理問題,也減少了動物實(shí)驗(yàn)所需的成本開支。目前,原代肝細(xì)胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究,包括探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學(xué)的研究;預(yù)測并解釋藥物—藥物間的相互作用;研究藥物的細(xì)胞毒性等。
肝細(xì)胞是人體內(nèi)重要的細(xì)胞之一,扮演著重要的代謝作用。然而,由于肝細(xì)胞的特殊性質(zhì),使得它們在體外的培養(yǎng)和研究變得非常困難。為了解決這個問題,科學(xué)家們開發(fā)了許多不同的肝細(xì)胞培養(yǎng)方法,其中包括貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)。隨著3D培養(yǎng)技術(shù)的出現(xiàn),原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍也進(jìn)一步得到了擴(kuò)展。3D培養(yǎng)是一種將細(xì)胞培養(yǎng)在三維空間中的方法,可以更好地模擬體內(nèi)的情況。在3D培養(yǎng)中,肝細(xì)胞可以形成復(fù)雜的結(jié)構(gòu),從而更好地模擬體內(nèi)的情況。此外,3D培養(yǎng)還可以使原代肝細(xì)胞更好地保持其原有的形態(tài)和功能,從而更好地研究肝細(xì)胞的生理和病理過程。原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)和研究對于了解肝臟的生理和病理過程至關(guān)重要。不同的原代肝細(xì)胞培養(yǎng)方法各有優(yōu)缺點(diǎn),科學(xué)家們需要根據(jù)具體的研究目的選擇合適的方法。隨著3D培養(yǎng)技術(shù)的不斷發(fā)展,相信原代肝細(xì)胞的研究將會更加深入。代肝細(xì)胞的研究將會更加深入,為藥物研發(fā)和毒理學(xué)研究提供更加準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)和依據(jù)。立沃生物的原代肝細(xì)胞配套提供多種細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑,包括細(xì)胞復(fù)蘇、鋪板、維持培養(yǎng)基和培養(yǎng)酶等。
原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中,根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性,可分為懸浮型和貼壁型兩大類。原代肝細(xì)胞懸浮生長時可以呈單個細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán),胞體為圓形。其優(yōu)點(diǎn)是在培養(yǎng)液中生長,生存空間大,允許長時間生長,便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細(xì)胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性,細(xì)胞相互接觸后可抑制細(xì)胞的運(yùn)動,因此細(xì)胞不會相互重疊于其上面生長。細(xì)胞生長、匯合成片后,雖發(fā)生接觸抑制,但只要營養(yǎng)充分,仍可增殖分裂,但當(dāng)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定密度后,由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響,細(xì)胞分裂停止,稱為密度抑制。當(dāng)肝細(xì)胞被分離后,可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在開始的4~6h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致,隨時間的延長而迅速下降,故懸浮肝細(xì)胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞有足夠的時間從損傷中恢復(fù)過來,保持了正常肝細(xì)胞的生物學(xué)特征及代謝活性,一般用于酶誘導(dǎo)研究、藥物細(xì)胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。目前,分離原代肝細(xì)胞的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。深圳原代肝細(xì)胞分離
原代肝細(xì)胞作為體外藥物代謝研究的“金標(biāo)準(zhǔn)”,在藥物研發(fā)和毒理學(xué)研究中具有重要的意義。廣東新西蘭兔原代肝細(xì)胞種類
在進(jìn)行原代肝細(xì)胞培養(yǎng)時,通常需要對分離得到的肝細(xì)胞進(jìn)行特殊的處理或篩選,以提高肝細(xì)胞的存活率和純度。以下是一些常見的處理或篩選方法:1.密度梯度離心:密度梯度離心是一種常用的分離和篩選肝細(xì)胞的方法。通過使用密度梯度介質(zhì)(如Percoll或Ficoll),可以將肝細(xì)胞與其他細(xì)胞分離出來,從而提高肝細(xì)胞的純度。2.選擇性貼壁:選擇性貼壁是一種基于肝細(xì)胞和其他細(xì)胞在培養(yǎng)皿上的貼壁特性不同的篩選方法。肝細(xì)胞通常會在培養(yǎng)皿上貼壁生長,而其他細(xì)胞則不會。通過選擇合適的培養(yǎng)條件和時間,可以篩選出貼壁生長的肝細(xì)胞。3.流式細(xì)胞術(shù):流式細(xì)胞術(shù)是一種基于細(xì)胞表面標(biāo)志物的篩選方法。通過使用熒光標(biāo)記的抗體,可以識別和篩選出表達(dá)特定標(biāo)志物的肝細(xì)胞。4.細(xì)胞篩選:細(xì)胞篩選是一種基于細(xì)胞形態(tài)和功能的篩選方法。通過觀察細(xì)胞的形態(tài)和功能特征,可以篩選出符合要求的肝細(xì)胞。以上是一些常見的原代肝細(xì)胞處理或篩選方法,不同的方法適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求和研究目的。在進(jìn)行原代肝細(xì)胞培養(yǎng)時,需要根據(jù)具體情況選擇合適的處理或篩選方法,以提高肝細(xì)胞的存活率和純度。廣東新西蘭兔原代肝細(xì)胞種類