染色的一般原則:因檢測細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同,因而流式檢測的熒光補(bǔ)償也不同,因此建議每次檢測均需使用凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞做單陽對照,進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。標(biāo)記抗體常用熒光素FITC,EGFP激發(fā)光:488nm發(fā)射光:525nm;使用面較廣,價(jià)格便宜。PE激發(fā)光488nm發(fā)射光575nm,此熒光的激發(fā)效率較佳,故此熒光得到的信號較強(qiáng);檢測某些弱表達(dá)的抗原,推薦使用此熒光素。價(jià)格較FITC昂貴。APC激發(fā)光633nm,發(fā)射光660nm,在配有雙激光的流式細(xì)胞儀上,此熒光染料可與7-AAD或PI共同使用來避開自帶綠色熒光的樣本。流式細(xì)胞儀相關(guān)試劑盒。為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。天津如何使用糖原染色試劑盒量大從優(yōu)
糖原染色正常值:正常情況下,紅細(xì)胞系統(tǒng)的原、幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞;粒細(xì)胞系統(tǒng)的原粒細(xì)胞、原單核細(xì)胞和大多數(shù)淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)。自早幼粒階段以后的粒細(xì)胞和幼單核細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng)。糖原染色臨床意義:(1)急性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴組織惡性增生性疾病、紅白血病、戈謝病的原始細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)或陽性反應(yīng);缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙、骨髓增生異常綜合征亦可呈陽性反應(yīng);急性粒細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、良性淋巴細(xì)胞增多癥、尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性反應(yīng)或弱陽性反應(yīng)。巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等,幼紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)。偶有個(gè)別幼紅細(xì)胞呈陽性反應(yīng)。(2)幫助鑒別不典型巨核細(xì)胞和霍奇金細(xì)胞,巨核細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng);霍奇金細(xì)胞呈弱陽性或陰性反應(yīng)。(3)幫助鑒別白血病細(xì)胞和腺骨髓轉(zhuǎn)移的腺細(xì)胞,腺細(xì)胞呈陽性反應(yīng)??诒玫奶窃旧噭┖心募冶阋颂悄虿⌒阅I小球硬化癥或血管病的診斷。
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過碘酸(又稱高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時(shí)應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時(shí)間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。
粘液染色法:粘液一般有以下幾點(diǎn)特性:(1)對鹽基性染料有親合力,因此在HE染色中、切片上的粘液呈污穢藍(lán)色。(2)對某種鹽基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺藍(lán)有異染性。(3)遇醋酸發(fā)生沉淀,胃粘蛋白則除外。(4)溶于弱堿溶液。常用的粘液染色有以下幾種:1、P.A.S染色法:操作方法同前,結(jié)果;中性粘液性物質(zhì),某些酸性粘液物質(zhì)呈紅色,核呈藍(lán)色。2、AB/P.A.S染色法:該種方法的特點(diǎn)是能同時(shí)顯示出酸性和中性粘液物質(zhì)。操作方法:(1)切片常規(guī)脫蠟入水。(2)3%醋酸液洗2分鐘,入1%阿利新蘭醋酸液(PH2.5)10-20分鐘。(3)蒸餾水洗。(4)按P.A.S染色程序。(5)蘇木素淡染2-3分鐘,水洗。(6)常規(guī)脫水、封片。巨幼紅細(xì)胞貧血、溶血性貧血、再障的幼紅細(xì)胞PAS染色為陰性。
染色試劑盒:GUS基因就是β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuronidase),是從大腸桿菌K-12菌株分離出的一種酸性水解酶。該基因產(chǎn)物為β-葡萄糖苷酸酶,屬水解酶類,相當(dāng)穩(wěn)定而不易降解,以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物,其反應(yīng)產(chǎn)物可用多種方法檢測出來。由于絕大多數(shù)植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性,因此這個(gè)基因被普遍應(yīng)用于基因調(diào)控的研究中。根據(jù)GUS基因檢測所用的底物不同,可以選擇三種檢測方法:組織化學(xué)法、分光光度法和熒光法(靈感度為分光光度檢測法較高)。其中較為常用的是組織化學(xué)法。如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病。福建糖原染色試劑盒哪家便宜
切片脫蠟應(yīng)盡量干凈,否則影響染色效果。天津如何使用糖原染色試劑盒量大從優(yōu)
糖原染色(過碘酸-雪夫反應(yīng))原理多糖中乙二醇基經(jīng)過碘酸氧化成二醛基與無色品紅結(jié)合,形成紫紅色化合物。沉積于含糖原的胞漿中。結(jié)果:胞漿中出現(xiàn)彌散狀,顆粒狀,塊狀紅色為陽性。無紅色顆粒為陰性_x005f_x000c_臨床意義1、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)粒系:原粒細(xì)胞糖原含量很低,隨著細(xì)胞的分化成熟,糖原含量逐增加,至成熟階段糖原含量十分豐富。淋巴細(xì)胞:糖原常凝聚成顆?;驂K狀。巨核細(xì)胞-血小板系統(tǒng):PAS反應(yīng)呈粗大的紫色顆?;驁F(tuán)塊。正常紅系:陰性。對疾病診斷的意義白血病類型的鑒別:急性粒細(xì)胞白血?。涸剂<?xì)胞呈陰性或弱陽性反應(yīng),以彌散性為主;急性淋巴細(xì)胞白血病原、幼淋巴細(xì)胞多呈粗顆粒、塊狀陽性反應(yīng)天津如何使用糖原染色試劑盒量大從優(yōu)